Duale genetische Kodierung von Acetyllysin und nicht‐hydrolysierbarem Thioacetyllysin mittels Flexizym
Abstract
Die Acetylierung von Lysin‐Bausteinen ist eine wichtige posttranslationale Proteinmodifikation. Die Lysin‐Acetylierung in Histonproteinen und deren Interaktion mit anderen posttranslationalen Modifikationen in Histon‐ und nicht‐Histon‐Proteinen ist essentiell bei der DNA‐Replikation, DNA‐Reparatur und Transkriptionsregulation. Wir verwendeten die Flexizym‐Technologie, um die Aminosäuren Acetyllysin (AcK) und nicht‐hydrolysierbares Thioacetyllysin (ThioAcK) in vitro in intakte Proteine einzubauen. ThioAcK und AcK wurden in humanes Histon H3 positionsspezifisch inkorporiert. Dies erfolgte entweder individuell oder paarweise bei verschiedenen Lysin‐Positionen innerhalb des humanen Histon H3. Die Thioacetylgruppe im Histon H3 konnte nicht durch die Histon‐Deacetylase Sirtuin (Typ 1) abgespalten werden, wie durch diese Studie gezeigt wurde. Diese Methode des AcK‐ und ThioAcK‐Einbaus stellt ein wichtiges Werkzeug für die Untersuchung der Protein‐Acetylierung sowie deren Rolle in der Interaktion mit weiteren posttranlationalen Modifizierungen dar.
Document Details
- Document Type
- Pub Defense Publication
- Publication Date
- Feb 23, 2016
- Source ID
- 10.1002/ange.201511750
Entities
People
- Chenguang Fan
- Denton Hoyer
- Dieter Söll
- Hai Xiong
- Markus Englert
- Noah M. Reynolds
- Scott J. Miller
Organizations
- National Institutes of Health
- Yale University